细胞培养历程中时�；岱浩鹫庋蚰茄奈侍�,别小看细胞培养,里面却蕴含着大学问.通过与使用者相同你会发明了许多可以制止的问题爆发,下面对细胞培养历程中保存的几大误区做详细解析。
误区一
XX实验室培养XX细胞用的就是这个培养基 ，我用一样的就可以
?选择培养基没有一定的标准 ，有几点建议可供参考：
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参考：文献
实验：实验室常用的培养基
按需：凭据细胞株的特点、实验的需要来选择
最客观：用多种培养基培养 ，凭据实际效果选择 ，但较繁琐
误区二
恒久使用抗生素 ，以对抗污染
? 细胞培养时不应通例使用抗生素
? 连续使用抗生素会增进抗生素耐药性细胞株的爆发 ，导致轻度污染连续保存 ，一旦将抗生素从培养基中去除 ，这种轻度污染最终将生长成大规模污染
? 连续使用抗生素会掩盖支原体熏染及其他隐性污染
? 有些抗生素会与细胞爆发交叉反应 ，滋扰您研究的细胞历程
误区三
培养基中的谷氨酰胺容易降解 ，需要不绝增补
如果正确使用 ，一般不需要补加
? 4℃避光生存
? 分装 ，不要重复预热
? 含有谷氨酰胺的培养基 ，开封后应尽快用完
误区四
培养基误存于-20℃,溶解后继续使用
? 在-20℃下 ，培养基中的盐容易析出 ，培养基再次融化后 ，有的盐可能无法重新溶解 ，从而导致培养基营养身分和渗透压改变 ，培养细胞时 ，容易细胞破裂而死亡
? 建议抛弃该培养基,重新购置新的培养基用于细胞培养
误区五
常见细胞系无需检测血清批次 ，可以直接切换
? 血清来源于动物 ，组成身分有1000种左右 ，每个批号的组分和组分含量都是不确定的 ，批间差别是可能保存的
? 如果某一个批次血清使用效果较好 ，记着批号 ，订货的时候给予说明
? 如果需要换差别批号的血清 ，提前盘问COA文件 ，寻找测试结果接近的批次
? 先订购一瓶试用 ，试用乐成之后再大宗订购该批号血清
误区六
血清灭活以后使用效果更好
? 血热灭活的血清对大大都细胞而言是不需要的 ，高温处理可能影响了血清的品质 ，造成细胞生长速率的降低 ，经过热处理的血清 ，沉淀物增多
? 灭活补体系统
补体加入溶解细胞事件 ，刺激平滑肌收缩 ，细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞 ，刺激平滑肌收缩等
? 在免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞宁静滑肌细胞时 ，推荐使用热灭活血清
血清必须热灭活 ？
热灭活是指将血清于56℃处理30分钟 ，灭活血清中的补体。
实验标明 ，经热灭活的血清对细胞生长可能仅有微小增进或完全没有任何作用 ，甚至通常因高温处理而损失掉血清中部分营养身分 ，从而影响血清质量 ，造成细胞生长速率降低。热灭活历程中因局部温度过高、摇晃不均匀或灭活时间过长 ，都会造成血清品质下降。且经热灭活后的血清会增加爆发卵白沉淀概率 ，这些沉淀物在倒置显微镜下视察像是“小黑点” ，通�；崛醚芯空呶笠晕茄逶馐芪廴�。
因此 ，若非必须血清不需要做热灭活 ，而少数对补体敏感的细胞实验 ，如某些免疫学实验或腺病毒包装等 ，可酌情对血清进行热灭活操作。
热灭活要领示例：
1.热灭活前须先摇匀解冻后的血清并恢复至室温；
2.取部分摇匀血清置于50ml离心管中 ，并准备同规格比照管一个；
3.比照管内加入血清等体积水；
4.比照管内插入温度计进行温度预试 ，当温度抵达56℃时将恢复至室温的血清放入水浴锅30min；
5.灭活历程中需要每隔5min轻轻晃摆荡匀 ，以包管温度均一。
误区七
原代细胞的培养及操作与传代细胞一样
? 与细胞系差别 ，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以避免遗传漂移。
? 当细胞传代时 ，使用低浓度的胰卵白酶并在显微镜下密切监测细胞。别的 ，记得在胰卵白酶消化后完全中和细胞中的胰酶 ，因为任何活性的胰卵白酶都将损伤细胞。
? 通常我们不推荐重新冻存原代细胞 ，因为这可以增进细胞衰老和/或导致功效变革。原代细胞很是敏感 ，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
? 原代细胞对解冻历程很是敏感 ，因此将小瓶置于37℃水浴中 ，坚持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶 ，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪 ，以便可以立即用于接种细胞 ，并置于培养箱中。
? 我们不建议在解冻后离心细胞 ，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记着 ，在恢回复代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。
